談?wù)凟LISA實(shí)驗(yàn)中關(guān)于跳孔的疑問及解決方法

更新時(shí)間：2021-08-10

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　　今天小編給大家講講ELISA實(shí)驗(yàn)中關(guān)于跳孔的疑問及解決方法：

　　問：我剛配置試劑的時(shí)候中斷了，這是否會(huì)影響我的實(shí)驗(yàn)結(jié)果?

　　答：這可能會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生波動(dòng)的曲線。在移液之前確定所有的標(biāo)準(zhǔn)品或者樣品是否配制完好。請(qǐng)?jiān)谠噭┡渲仆甑?5-20分鐘內(nèi)滴加入板內(nèi)。(除非特別說(shuō)明)

　　問：我是否需要一個(gè)多道移液器?

　　答：在配制諸如底物，酶結(jié)合物，或者稀釋液的時(shí)候，最好選擇連續(xù)或多道移液器。

　　問：如果我沒有平衡試劑會(huì)怎樣?

　　答：沒有平衡的試劑會(huì)導(dǎo)致孔之間溫度不均，使整個(gè)酶標(biāo)板的信號(hào)產(chǎn)生變異。除非特別說(shuō)明，試劑一般在使用之前都要平衡至室溫。

　　每次檢測(cè)都會(huì)有推薦的孵育時(shí)間和溫度。冷凍的試劑一般需要更長(zhǎng)的孵育、間。所以最好使用說(shuō)明書上推薦的孵育溫度和時(shí)間。

　　問：我是否需要蓋板?

　　答：參看試劑盒內(nèi)說(shuō)明書。如果說(shuō)明書內(nèi)的實(shí)驗(yàn)步驟中有推薦使用蓋板，則在使用時(shí)應(yīng)選用與酶標(biāo)板配套的蓋板，使邊緣與酶標(biāo)板緊密契合。如果蓋板的一邊突起，則會(huì)產(chǎn)生信號(hào)的差別。

　　問：酶標(biāo)儀的設(shè)置怎樣影響我的結(jié)果?

　　答：對(duì)于底物測(cè)定，如果讀數(shù)時(shí)間等于或超過2秒/孔，使從第一孔到最后一孔在讀書時(shí)存在時(shí)間上的延誤，會(huì)導(dǎo)致結(jié)果的異變。在底物反應(yīng)階段，辣根過氧化物酶會(huì)一直作用直到底物反應(yīng)*。而由于時(shí)間的延誤，底物越來(lái)越少，底物反應(yīng)也受到影響。將酶標(biāo)儀的讀數(shù)時(shí)間設(shè)定為1.0秒/孔。

　　問：我是否可以根據(jù)自己的方案來(lái)調(diào)整孵育時(shí)間?

　　答：更改孵育時(shí)間或溫度會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)不能達(dá)到平衡或過度反應(yīng)。請(qǐng)按照說(shuō)明書推薦的孵育時(shí)間和溫度操作。如果同時(shí)進(jìn)行多項(xiàng)檢測(cè)，對(duì)每孔必需分別計(jì)時(shí)已避免孵育不足或過度孵育。

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