1.
植物Elisa試劑盒標本及采集、貯運因素:
①嚴重溶血:以HRP為標記的ELISA測定中,殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色造成假陽性;
②混有紅細胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈
③如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng);
④植物Elisa試劑盒標本凝固不全,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在植物Elisa試劑盒測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;
⑤植物Elisa試劑盒采血試管洗滌不*、反復(fù)使用易交叉污染
⑥塑料試管能吸附抗原物質(zhì) ,樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。
血清標本宜在新鮮時檢測,嚴重溶血標本禁用。一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃,標本在冰箱中保存時間過長導(dǎo)致血清IgG 聚合,使間接法的 試劑 本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢吮緫?yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使 抗體 效價跌落,所以測 抗體 的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。
2.
植物Elisa試劑盒之操作技術(shù)的影響:
①植物Elisa試劑盒應(yīng)保證清潔,整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至限度。從而提高檢測的特異性。并得到更準確、可靠的實驗結(jié)果。
②合理安排檢測量,以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
③植物Elisa試劑盒加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
④用洗板機洗板時,保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干:還要防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
⑤顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。