ELISA檢測(cè)試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題處理
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| 出現(xiàn)問(wèn)題 | 出現(xiàn)問(wèn)題的原因 | 解決辦法 |
曲線(xiàn)
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OD值不正常
| 試劑盒未回溫 | 試劑盒回溫到25℃ |
| 溫度控制不好 | 控制正確溫度 |
| 孵育時(shí)間不準(zhǔn)確 | 控制孵育時(shí)間 |
| 洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、洗滌次數(shù)增加 | 洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干 |
| 陽(yáng)光直射，對(duì)著風(fēng)直接吹 | 避風(fēng)避光 |
| 酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)錯(cuò)誤 | 酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)450nm |
| 抗體的稀釋錯(cuò)誤 | 正確的稀釋抗體 |
| 水質(zhì)問(wèn)題 | 用娃哈哈礦泉水代替 |
白 板
| 洗滌液配制錯(cuò)誤 | 正確的配制洗滌液 |
| 少加液體（抗體、酶標(biāo)記物、A液、B液） | 正確的步驟加液體 |
| 錯(cuò)加液體 | |
無(wú) 梯 度
| 標(biāo)準(zhǔn)品也污染 | 換標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)板 |
| OD值不正常 | 控制溫度時(shí)間在做一次 |
| 人為點(diǎn)板 | / |
線(xiàn) 性 不 好
| OD值不正常 | 控制溫度時(shí)間在做一次 |
| 人為點(diǎn)板 | / |
回 收 率
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空白管陽(yáng)性高
| 樣本本身就是陽(yáng)性樣本 | 換陰性樣本做回收率 |
| 空白管在實(shí)驗(yàn)中被污染 | 實(shí)驗(yàn)中防止交叉污染 |
| 水質(zhì)原因 | 用娃哈哈礦泉水代替 |
偏 高
| 添加量不準(zhǔn)確 | 的添加量 |
| 添加濃度不適合 | 添加合適的濃度 |
| 取液吹干量多 | 準(zhǔn)確的取液吹干 |
| 取到其它相層液體 | 取需用相吹干 |
| 復(fù)溶液未稀釋或加入量少 | 正確的稀釋復(fù)溶液 |
偏 低
| 添加量不準(zhǔn)確 | 的添加量 |
| 添加濃度不適合 | 添加合適的濃度 |
| 取液吹干量少 | 準(zhǔn)確的取液吹干 |
| 復(fù)溶液稀釋錯(cuò)誤或加入量多 | 正確的稀釋復(fù)溶液 |
假陰、陽(yáng)性
| 水質(zhì)原因 | 點(diǎn)復(fù)溶液驗(yàn)證 | 用娃哈哈礦泉水代替 |
實(shí)驗(yàn)操作原因
| 吸取到其它相吹干 | 準(zhǔn)確的取液吹干 |
| 離心不* | 延長(zhǎng)離心時(shí)間 |
| 樣本的污染 | 更換樣本 |
| 乳化未處理* | 溫?。?0℃）處理乳化現(xiàn)象 |
儀器試劑原因
| 離心管未清洗干凈 | 正確的洗滌器具 |
| 有機(jī)溶劑的影響 | 做試劑空白看影響結(jié)果 |
| 衍生化試劑原因（長(zhǎng)時(shí)間衍生化試劑變質(zhì)） | 更換衍生化試劑 |
| 與曲線(xiàn)好壞相關(guān) | 保證曲線(xiàn)的正常 |
金標(biāo)檢測(cè)（T）線(xiàn)顏色較淺
| 尿液pH偏堿性 | 用0.01M HCl調(diào)節(jié)尿液pH值到7.0左右。 |
| 尿樣滴加過(guò)多 | 重新測(cè)定，尿樣按照說(shuō)明書(shū)，控制在2滴 |
| 尿液過(guò)于混濁 | 將尿液離心后，取上清液重新測(cè)定 |
金標(biāo)質(zhì)控（C）線(xiàn)不出現(xiàn)
| 檢測(cè)卡由于高溫、受潮等原因失效 | 尿樣需要重新檢測(cè)。 |
| 過(guò)了有效期失效。 | 該批號(hào)的金標(biāo)應(yīng)丟棄處理，尿液需要重新檢測(cè)
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| 操作過(guò)程中檢測(cè)卡沒(méi)有平放，導(dǎo)致液體樣品直接沖過(guò)檢測(cè)區(qū) | 尿樣需要重新檢測(cè)，且檢測(cè)卡平放于桌面上再加樣。 |
| 尿液樣品中含有較高的抑制或者干擾抗原抗體反應(yīng)的物質(zhì)（比如明礬、小蘇打、氧化劑、肌酐等） | 該尿液的檢測(cè)結(jié)果無(wú)效 |
| 金標(biāo)卡上在除了T和C線(xiàn)之外的其他地方出線(xiàn) | 金標(biāo)卡上的劃痕；膠體金在跑板過(guò)程中沒(méi)有*跑干凈而在卡上的痕跡； | 該檢測(cè)卡結(jié)果不可信，尿液需要重新檢測(cè)。 |
| 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性不好 | 操作人員的不一致，取樣的不一致，樣本數(shù)量的多少，加樣時(shí)間的長(zhǎng)短，洗滌條件不一致，加樣量不一致 | 盡量保持的實(shí)驗(yàn)一致性
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分析軟件的使用
| 不能設(shè)置和保存 | 正確的設(shè)置和保存 |
| 如何判斷曲線(xiàn)的好壞和分析結(jié)果 | 正確的判斷曲線(xiàn)的好壞和分析結(jié)果 |
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更新時(shí)間：2017-08-03 
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