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植物蔗糖合成酶(SS)ELISA試劑盒案例說明

更新時間:2017-09-06      瀏覽次數(shù):1209

植物蔗糖合成酶(SS)ELISA試劑盒(活性檢測)

英文名稱:Plant SS ELISA Kit
實驗類型:夾心法
檢測范圍:5 IU/ml  160 IU/ml
zui低檢測限:1.0 IU/ml。
應用范圍:血清、血漿、組織勻漿、細胞培養(yǎng)物上清或其它相關液體(本產(chǎn)品僅供實驗室科研及非臨床用途)

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被植物蔗糖合成酶(SS)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物蔗糖合成酶(SS)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

植物蔗糖合成酶(SS)ELISA試劑盒組成

試劑盒組成96孔配置48孔配置備注
微孔酶標板8孔×12條8孔×6條 無
標準品0.3mL×6管0.3mL×6管
樣本稀釋液6mL3mL
檢測抗體-HRP10mL5mL
20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋
底物A6mL3mL
底物B6mL3mL
終止液6mL3mL
封板膜2張2張
說明書1份1份
自封袋1個1個
 

1.  標準品濃度依次為:160、80、40、20、10、5 IU/ml

2.  經(jīng)過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過zui大標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。

注意事項

1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產(chǎn)品。

10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

 

 

 

洗板方法

手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。根據(jù)需要,重復此過程數(shù)次。

自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

 

 

 

實驗結果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。

Elisa試劑盒標準曲線圖

(此圖僅供參考)

 

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